Tiểu luận Chuẩn đoán virus PMWS bằng kỹ thuật Elisa - Nguyễn Thị Kim Ngân

Chuẩn Đoán Virus PMWS Bằng Kỹ Thuật ELISAGVHD: TS. Nguyễn Ngọc HảiSV: Nguyễn Thị Kim NgânMSSV: 061260881Nội dungĐặt vấn đề	Nội dungGiới thiệu về PMWSChuẩn đoán bệnh bằng indirect ElisaKết luậnTài liệu tham khảo2porcine circovirus 23Đặt vấn đề1996 xuất hiện một bệnh truyền nhiễm mới trên heo (miền tây Canada) với tác nhân gây bệnh chuyên biệt. PMWS (Post - Weaning Multisystemic Wasting Syndrome) đã trở thành một vấn đề nhận được nhiều quan tâm trên thế giới, đặc biệt ở Canada, Mỹ, Châu Âu và Viễn Đông. Hội chứng suy nhược, còi cọc trên heo sau cai sữa xảy ra với tỷ lệ chết cao trên 90%và thiệt hại nặng nề về kinh tế cho nhà chăn nuôi.Có nhiều phương pháp chuẩn đoán bệnh hiệu quả như PCR, hóa mô miễn dịch, in situ hybridization, nuôi cấy tế bào, ELISA, IFA. 4Phân bố bệnh trên thế giới5Nội dungGiới thiệu về PMWS	PMWS là một bệnh truyền nhiễm do porcine virus type 2 gây ra trên heo cai sữa, biểu hiện đặc trưng là sụt giảm cân rất nhanh, kèm theo các biểu hiện hô hấp và da nhợt nhạt. Heo bệnh thường hạch hẹn bị sưng to và có thể sử dụng làm dấu hiệu nghi ngờ trong chuẩn đoán PMWS. Bệnh gây chết chủ yếu ở heo lứa tuổi từ 5-12 tuần tuổi. 6Giới thiệu về PMWS (tt)Tác nhân gây bệnh Virus PMWS là : Virus DNA mạch vòng, sợ đơn.Kích thước 17 nm, 1759 bases.Thuộc họ Circoviridae, giống Circovirus thường được gọi là porcine circovirus (PVC). Gồm có 2 serotype được tìm thấy ở heo, bao gồm type 1 (PVC1) và type 2 (PVC2). 7Bộ gen của PVC gồm có sáu khung đọc mở (open reading frames-ORFs). ORFaa151-9922671-3603565-3894553-72951016-117461735-10378ORF1 mã hóa cho protein tham gia vào quá trình nhân lên của virus và ORF2 mã hóa cho protein cấu trúc của virus.9ĐỘ TƯƠNG ĐỒNGNucleotideaaNSTORF183%86%68-76%ORF267%65%Tác nhân gây bệnh (tt)Là loại virus nhỏ nhất được biết đến và có khả năng sống sót cao trong môi trường.PCV có khả năng đề kháng với môi trường acid (pH=3), chloroform hay nhiệt độ cao 56-70oC (virus chịu được 70oC trong 15 phút).PCV tồn tại lâu dài trong sản phẩm thịt heo, quần áo và những vật liệu tiếp xúc với heo bị nhiễm virus này.PCV1 được xem như là virus nhiễm thường xuyên và tự nhiên trên các tế bào thận heo PK15 và là virus không gây bệnh. Ngược lại PCV2 được xem là tác nhân gây PMWS.10Nguyên nhân gây nhiễmNhiễm từ tinh dịch heo bệnh, phân, phương tiện, vật dụng (quần áo, xe đẩy,) hay từ những loài khác (Chuột, Chim,)Tiếp xúc giữa heo bệnh với heo khỏe mạnh.Do Stress (trong quá trình vận chuyển, thay đổi môi trường, thay đổi chuồng trại,Do nhập nhiều heo với các độ tuổi khác nhau và chăn nuôi với mật độ dày đặcDo thú sản xuất liên tục.11Triệu chứngSốt 41 - 42 oC, đột tử, có thể xuất hiện những triệu chứng thần kinh.Sụt cân, hốc hác, lông thô ráp, da tái nhợt, chậm phát triển (giai đoạn 6-8 tuần tuổi).Một số trường hợp, bệnh thường kèm với một số triệu chứng về hô hấp (khó thở do viêm phổi) và tiêu hóa (tiêu chảy và loét dạ dày).Ngoại vi hạch bạch huyết sưng to.Thường phát hiện triệu chứng viêm da suy thận (PDNS) trong những đàn bị PMWS.Bệnh kéo dài nhiều tháng.1213CoughingLaboredbreathing14Bệnh tích đại thểXác súc vật bị gầy và da vàng hay xanh xao, hoàng đản, viêm gan, thận sưng lớn đồng thời phù thủng. Lách và nhiều hạch bạch huyết sưng to. Tuy nhiên, vẫn phải đặt nghi vấn trong những trường hợp hình ảnh tuyến bạch huyết sưng to.Thân bị sưng phồng với những đốm trắng nhỏ có thể quan sát bằng mắt từ bề mặt.Phổi thường dính, có đốm phù nề, có vằn và dai.Ngực, mô và cơ quan ổ bụng bị phù nề hay úng nước.15Phổi cứng cáp có tính chất giống như cao su, có vằn nâu nhạt, có màu nâu của PCV2 antigen16Bệnh tích vi thểBệnh tích thường thấy ở tế bào lympho17Chuẩn đoán bệnh bằng indirect ElisaCác phương pháp chuẩn đoán được áp dụng thực tế:Kỹ thuật hóa mô miễn dịchBệnh tích môPCRELISAIFA (indirect fluorescent antibody) .18Kháng nguyên (PCV2) gắn vào bề mặt đĩaỦ (qua đêm, 4oC) Rửa (PBST) Ủ (to phòng, sodium casein)Mẫu+đối chứng dương, âmThêm horseradish peroxidase + IgG Ủ (to phòng -2 Rửa Ủ (0,1M Na2CO3 buffer)Hoàn thành pứ với 2M H2SO4Đọc kết quả ở 492nM (Microplate Reader 3550 (Bio-Rad))19Chuẩn đoán bệnh bằng indirect Elisa (tt)Sơ đồ phản ứng Kết quảNgưỡng giá trị OD cho huyết thanh dương tính được xác định, tính toán dựa vào ý nghĩa mật độ quang học (OD) của huyết thanh đối chứng âm cộng với độ lệch hai chuẩn (S.D).2021Máy ElisaMicrotiter22Máy pha loãng máu theo thể tích23Kết luậnChuẩn đoán bệnh PMWS hơi khó khăn hơn vì bản thân PCV2 có thể hiện diện cả trên heo khỏe. Nên việc phát hiện PCV2 một mình không đủ cơ sở để kết luận thú bị PMWS. Vì thế trong chuẩn đoán PMWS cần đảm bảo 3 yêu cầu:Các dấu hiệu lâm sàng.Bệnh tích vi thể.PCV2 hiện diện trong mẫu bệnh phẩm.Phản ứng Elisa chỉ phát hiện ra kháng thể PCV2 nhầm phục vụ cho các nghiên cứu dịch tễ học và đáp ứng miển dịch của PCV2.24Tài liệu tham khảoCông nghệ sinh học trong thú y - Nguyễn Ngọc Hải, nhà xuất bản nông nghiệp, tr 52-54, tr 103-107.Luận văn tốt nghiệp: Phát hiện Porcine circovirus Type 2 bằng kỹ thuật PCR trên heo nghi mắc hội chứng gầy còm sau cai sữu.Luận văn tốt nghiệp: Bước đầu khảo sát tình hình nhiễm Porcine circovirus trên đàn heo nuôi tại một số tĩnh thành phía nam. end26