Bài giảng Kỹ thuật vi sinh cơ bản - Nguyễn Thị Ngọc Yến

GV: Nguyễn Thị Ngọc Yến
3 cột điểm
 Điểm 1: Vi sinh (B3)
 Điểm 2: Ký sinh trùng (B4/B5)
 Điểm 3: Thi (VS + KST)
 Ống nghiệm
 Que cấy
 Đĩa petri
 Môi trường
• Cấy
• Phân lập
• Nhuộm Gram
• Soi tiêu bản dưới kính hiển vi quang học
 Chuyển vi khuẩn từ MT hiện tại sang MT khác
 Mục đích:
 Cấy chuyền: giữ giống
 Tăng sinh
 Khảo sát hình thái và tính chất sinh lý, sinh hóa
 Kỹ thuật
 Cấy trên thạch nghiêng
 Cấy vào thạch đứng
 Cấy vào thạch lỏng
 Tách riêng các loài VSV từ quần thể ban đầu và đưa về
dạng thuần khiết
 Nguyên tắc
 Trải hỗn hợp VK trên MT với mật độ giảm dần
 Tb VK tách rời thành từng tb riêng rẽ
 Ủ 37oC/24h, 1 tb rời rạc sẽ phát triển thành một
khóm VK thuần chủng
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(9)
(8)
(10)
(11)
(12)
Cách 1: chỉnh bằng VK 10X, sau đó chuyển qua 100X
 VK 10X: Nâng bàn kính lên đến khi thấy thị trường
 Nhỏ dầu cèdre vào tiêu bản
 VK 100X: tinh chỉnh cho rõ
Lưu ý: dầu không chạm VK 40X
Cách 2: chỉnh trực tiếp bằng VK 100X
• Nhỏ dầu cèdre vào tiêu bản
• Nâng tiêu bản lên cao tối đa bằng ốc sơ cấp
• Hạ dần bàn kính đến khi nhìn thấy thị trường lướt qua
• Chỉnh ốc vi cấp ngược chiều đến khi thấy rõ thị trường
 Tiến hành
Trải vi khuẩn/ lame kính
Nhuộm tím gentian
Lugol (iod)
30s, rửa nước
Tẩy = cồn 96o
Nhuộm hồng fuschin
30s, rửa nước
30s, rửa nước
Làm khô, soi KHV
30s, rửa nước




Thuốc nhuộm màu 1
Thuốc nhuộm màu 2
Tẩy màu
Cố định màu
Vết trải
Trải vi khuẩn/ lame kính
Nhuộm xanh methylene
Làm khô, soi KHV
>= 2 phút
 Thao tác kỹ thuật cấy – phân lập từng cá nhân
 Nhuộm màu VK
 Nhuộm Gram: Staphylococcus aureus, E. coli
 Nhuộm đơn: Corynebacterium diphtheriae
 Sử dụng KHV theo 2 cách để quan sát
 Tiêu bản nhuộm sẵn:
Bacillus subtilis,
Vibrio cholerae,
Streptococcus faecalis
 Tiêu bản SV tự nhuộm