Giáo trình Sản xuất protein trong y học - Trần Hoàng Dũng (Phần 2)

 cách. tuy nhiên, tiến hành bằng cách sử dụng một helper SV40 virus có
khiếm khuyết ở một gen sớm để cung cấp 'muộn' chức năng trong chuyển hóa.tương tư
trong thực khuẩn (chương 3), SV40 có công suất hạn chế cho việc bổ sung các DNA
ngoại. Ngay cả với việc thay đổi gen hiện có, kích thước tối đa của đoạn DNA được
giới hạn trong bp 2300 ~ (Naim và Roth, 1994).
10.3.2. Adenoviruses
Adenoviruses chịu trách nhiệm cho khoảng 25% gây ra các chứng cảm lạnh
thông thường. Có rất nhiều loại khác nhau có thể gây nhiễm trùng ở người, nhưng tất
cả họ virus không có màng bao icosohedral (khoảng 60-90 nm dài) có chứa bộ gen
DNA sợi đôi tuyến tính kích thước ~ 36 kbp (Hình 10.4).
Hình 10.4. Adenovirus. (a) Electron micrograph of a human faecal adenovirus.
Image courtesy of Tony Oliver (IBMS London Region Virology Discussion
Group). (b) The adenoviral genome. The approximate location of some of the early (E)
and late (L) genes are shown, along with the site of the major late promoter (MLP),
and an approximately 300 bp packaging site (), which is essential for the packaging of
Sản xuất protein trong y học
243
viral genome into the assembled capsid. Both ends of the genome are composed of 100
bp inverted terminal repeats (ITRs). ITRs serve as origins of DNA replication by
priming the replication process and acting as assembly points for the proteins of the
replication complex. The adenovirus genome also encodes several viral associated
RNAs (VA RNAs) that are transcribed constitutively at a high level using RNA
polymerase III. VA RNAs are ~160 nucleotides in length and have a high GC content
and a high degree of secondary structure. They may serve to regulate mRNA
splicing or to control of the rate of translation of late genes (Mathews, 1995)
Các phiên mã bộ gen của adenovirus xảy ra trong hai giai đoạn - đầu và cuối -
diễn ra trước hoặc sau khi sao chép DNA virus, tương ứng. Phiên mã được đi kèm với
một loạt các sự kiện nối phức tạp, với bốn khu vực đầu tiên của phiên mã gen (E1-E4,
cần thiết để nhân lên của virus), và một MLP sản xuất các gen cuối (L1-L5, sản xuất ra
các lớp vỏ của virus) ( Logan và Shenk, 1984). Các virus này sẽ tái tạo trong các dòng
tế bào động vật có vú khác nhau khi di truyền DNA thường là transfected vào chúng.
Ngoài ra, virus này tạo ra số lượng lớn các con cháu (lên đến 105 virion mỗi tế bào bị
nhiễm), có nghĩa là các hạt siêu vi, tái tổ hợp hoặc cách khác, có thể được tinh chế với
số lượng lớn một cách dễ dàng.
Hầu hết các vector có nguồn gốc từ các hệ gen được sao chép thiếu adenoviral.
Họ thiếu E1 gen thiết yếu và thường có gen không cần thiết E3. Kể từ chúng được sao
chép lỗi, chúng phải được tuyên truyền trong các dòng tế bào có cũng được transfected
với DNA chứa gene E1 - ví dụ: con người dòng tế bào thận phôi 293 - E1 cung cấp
chức năng trong trans (Graham và cộng sự, 1977). Đây là loại vector có công suất tối
đa cho DNA ngoại khoảng 7 kbp. vectơ khác adenoviral hoặc thiếu các gen E2 hoặc
E4 tại Ngoài E1 và E3 để tăng khả năng mang DNA ngoại, các chức năng một lần nữa,
được cung cấp ở dòng tế bào (Gorziglia và cộng sự, 1996).
Adenoviruses mang DNA ngoại có thể được sử dụng để sản xuất các protein
ngoại trong các loại tế bào khác nhau, nhưng biểu hiện gen này thường thoáng qua vì
DNA của virus không tích hợp vào hệ gen của vật chủ. Việc thiếu tích hợp có thể, tuy
nhiên, có lợi thế nếu vectơ adenoviral được sử dụng trong những liệu pháp gen (xem
bên dưới). Ngoài ra, các mô biểu hiện gen cụ thể là có thể với vectơ adenoviral nếu
gene ngoại được đặt dưới sự kiểm soát của promoter di động cụ thể và các yếu tố
enhancer, ví dụ: các myosin chuỗi ánh sáng 1promoter (Shi, Wang và Worton, 1997)
hoặc cơ promoter mịn tế bào SM22a (Kim và cộng sự, 1997), hoặc bằng cách phân
phối trực tiếp tới một khu vực trong cơ thể (Rome và cộng sự, 1994).
Adenoviral vector rất hữu ích bởi vì nó được đánh giá cao hiệu quả đưa được
DNA vào trong tế bào. Họ có khả năng chứa DNA chèn lên đến kích thước khoảng 8
kbp và họ có thể lây nhiễm sang cả sao chép và các tế bào khác biệt. Ngoài ra, kể từ họ
không tích hợp vào hệ gen của chủ, họ không thể mang lại hiệu ứng gây đột biến gây ra
bởi các sự kiện hòa nhập ngẫu nhiên. Những khó khăn của adenoviral vectơ bao gồm.
 Biểu hiện là thoáng qua, DNA của virus không tích hợp vào máy chủ.
Sản xuất protein trong y học
244
 Vectơ Adenoviral được dựa trên một tác nhân gây bệnh rất phổ biến của con
người và trong cơ thể có bị cản trở bởi những phản ứng miễn dịch của tế bào chủ
với một loại virus.
10.3.3 Liên quan đến Adeno-Virus (AAV)
Adeno virus-liên lần đầu tiên được phát hiện như là một chất gây ô nhiễm của
các chế phẩm adenovirus (Atchison và cộng sự, 1965). Mặc dù tên của nó, AAV
không cho biết sự liên quan đến adenovirus nhưng nó là một virus thuộc họ
parvovirus, trong đó có một sợi đơn DNA trong bộ gen của nó có kích thước khoảng
5000 nucleotide. Các virus thường được tìm thấy trong mô amidan con người, mặc dù
không có bệnh nào của con người có sự liên hệ với nó. Các AAV không thể tồn tại
một cách độc lập, mà đòi hỏi sự hiện diện của virus khác, ví dụ như adenovirus, để
hoàn thành replicative chu kỳ của mình. Một số các gen adenovirus đầu cần thiết cho
việc thúc đẩy sự nhân rộng AAV. Tuy nhiên, việc điều trị các tế bào nhiễm AAV với
ánh sáng cực tím, hoặc một số chất gây ung thư cycloheximide có thể được dùng để
thay thế virus helper (Bantel-Schaal, 1991). Vì vậy cần phải có một loại virus trợ giúp
cho sự thay đổi môi trường cellulase tốt hơn protein của một virus.
Trong trường hợp không có virus helper, bộ gen AAV tích hợp vào trong tế bào
chủ, nơi mà nó vẫn còn là một provirus tiềm ẩn. Không có sự tích hợp của DNA virus
vào bộ gen tế bào vật chủ, tuy nhiên, một quá trình ngẫu nhiên, nó được tích hợp
vào cùng một vị trí di truyền trên nhiễm sắc thể 19 (Kotin và cộng sự, 1990.).
AAV dựa vào vectơ khai thác hai chuỗi ITR 145 được tìm thấy trong bộ gen của
virus, đó là những yếu tố DNA chỉ cần thiết cho sao chép, vận chuyển, hội nhập
provirus và cứu hộ. Các cấu trúc lặp đi lặp lại vòng lặp formhairpin là rất cần thiết cho
nhân bản của virus.
Việc nhân bản vô tính vào hệ gen của AAV được hỗ trợ bởi việc lắp lặp đi lặp
lại đầu cuối, đảo ngược thành một vector plasmid và sau đó nhân bản foreign DNA
giữa chúng. Đoạn linear DNA chứa foreign gene hai bên là ITRs có thể được chuẩn bị
từ plasmid tiếp theo quá trình cắt bằng các enzyme giới hạn. Sau đó các DNA này
được vận chuyển vào tế bào, cùng với helper plasmid để cung cấp các gen cần thiết
cho sự hội nhập AAV virus. Viral có thể dư sau khi chuẩn bị bằng cách tiêm nhiễm
các tế bào với adenovirus để kích thích AAV lytic nhân bản và đóng gói. Cuối cùng,
một phần các virus AAV có thể được tinh chế từ các adenovirus gây ô nhiễm bằng
cách sử dụng phương pháp hóa sinh (Gao và cộng sự, 2000).
Đây là loại phương pháp tiếp cận làm mất chất lượng được sử dụng của
adenovirus để phục hồi AAV các hạt. Khả năng ô nhiễm cao và do đó tái tổ hợp sản
xuất AAV không thể được sử dụng để thử nghiệm liệu pháp gen của con người.
An cách tiếp cận khác để sản xuất tái tổ hợp hạt AAV được hiển thị trong Hình 12.5. Ở
đây, các gene ngoại hai bên là ITRs là đồng transfected vào con người 293 tế bào thận
cùng với hai mảnh DNA khác - một có chứa các gen cần thiết cho việc sản xuất sợi
đơn AAV di truyền DNA, và mang các gen adenoviral khác cần thiết cho lytic nhân
rộng và bao bì (Matsushita và cộng sự, 1998).
Sản xuất protein trong y học
245
Hình 10.5. Việc sản xuất tái tổ hợp hạt AAV mà không nhiễm adenoviral. Một
đoạn DNA tuyến tính có chứa một gen nước ngoài, dưới sự kiểm soát của một
promoter thích hợp để nó có thể được thể hiện, là transfected vào dòng tế bào thận
293ở người (trong đó thể hiện gen E1 adenoviral) cùng với DNA có chứa các Rep
AAV và Cap gen, và một đoạn DNA mang E2A adenoviral, E4 và RNA gen VA. Các
Rep và Cap protein được yêu cầu để sản xuất sợi đơn AAV và để đóng gói chúng trong
các protein . Các helper protein từ adenovirus cần thiết để nhân rộng lytic AAV (E1,
E2A, E4 và VA RNA) được sản xuất trong các tế bào để thúc đẩy sự hình thành của
các hạt virus có chứa các gen ngoại. Những sau đó có thể được sử dụng để lây nhiễm
các tế bào mục tiêu.
Các hạt AAV tái tổ hợp đượcthu từ thủ thuật này sau đó có thể được sử dụng
để lây nhiễm các tế bào mục tiêu, trong đó các gen ngoại sẽ được thể hiện. vector
AAV đã được sử dụng để chuyển DNA ngoại vào nhiều loại tế bào, bao gồm cả tế bào
thần kinh (Davidson và cộng sự, 2000), cơ (Pruchnic và cộng sự, 2000) và các tế bào
biểu mô (Pajusola và cộng sự, 2002). Các vị trí dự đoán của hội nhập DNA vào trong
tế bào chủ, khả năng biến đổi cả hai phân chia, sự phân chia tế bào, và tiến bộ trong
khả năng lây nhiễm nhiều loại tế bào trong cơ thể đã thực hiện các vector AAV rất hứa
hẹn cho liệu pháp gen (Sanlioglu và cộng sự , 2001).
10.3.4 Retrovirus
Retroviruses là virus động vật duy nhất hoà nhập vào bộ gen của tế bào chủ
trong chu kỳ sinh trưởng bình thường. Có hai nhóm retrovirus gây bệnh con người -
retroviruses HTLV (ví dụ virus bệnh bạch cầu tế bào T ở người, HTLV- 1) (yoshida và
seiki, 1987) và lentiviruses (ví dụ virus gây bệnh xi - đa ở người, HIV - 1) (Luciw và
cộng sự, 1984) - nhưng retroviruses đã tìm thấy trong rất nhiều sinh vật, bao gồm cả
động vật có xương sống và động vật không xương sống. Chúng được bao bọc bởi lớp
vỏ (đường kính khoảng 100 nm), lớp vỏ bọc ở dạng màng kép lipid chiết xuất từ tế
bào của chính nó. Lớp vỏ bao bọc cũng chứa một số protein mã hoá cho virus.Sự
Sản xuất protein trong y học
246
nhiễm trùng xảy ra do tương tác thuốc của protein bao bọc với thụ quan cụ thể trên bề
mặt của tế bào chủ (sommerfelt, 1999). Thụ quan ràng buộc dẫn đến sự hoạt hoá của
hạt virus (Hình 10.6).
Hình 10.6 Retroviruses. (a) cấu trúc của hình thành tích hợp của bộ gien
retroviral điển hình. Và lặp lại thiết bị cuối dài, phải trái (ltrs) cạnh sườn gien cấu
trúc (bịt miệng, pol và env). (b) chu kỳ sống retroviral.
Uncoating từng phần của hạt xảy ra trước khi enzyme transcriptase đảo ngược
biến RNA bộ gen thành bản sao sợi ADN kép thẳng. Tổng hợp ADN bắt đầu từ phân
tử tRNA cụ thể (mak và kleiman, 1997) từ tế bào chủ trong đó virus đã được hình
thành, như transcriptase đảo ngược, được bao bọc trong hạt virus của nó. DNA
proviral mới hình thành sau đó hợp nhất ngẫu nhiên vào bộ gen vật chủ nơi gen virus
được thể hiện để làm mới protein của virus và dẫn đến hình thành hạt virus mới. Sự
tạo ra hạt virus mới không trực tiếp dẫn đến chết tế bào chủ, nhưng hạt mới hình thành
chồi từ bề mặt tế bào.
Bệnh liên quan đến nhiễm trùng retroviral thường là hậu quả của đầu bám
retroviral vào bộ gen vật chủ, hoặc do sự biến đổi tế bào gây bệnh của chúng, ví dụ
như sự xâm nhập của hệ miễn dịch bởi HIV - 1 dẫn đến bệnh AIDS.
Bộ gien của retrovirus được tạo thành từ sự đồng nhất chuỗi axit ribonucleic
phân tử (giữa 8000 và 11000 nucleotid), giống với mRNA phân tử.
Bộ gen axit ribonucleic virus không thể được dùng làm mẫu dịch mã trước khi
tổng hợp vào vật chủ. Phiên mã và dịch mã tiếp theo chỉ xảy ra sau khi DNA phiên bản
Sản xuất protein trong y học
247
bộ gen đã được tổng hợp vào vật chủ. Tất cả retroviruses chứa ba cấu trúc gen chính,
mỗi một trong những cái ấy mã hoá một số protein hoạt tính (Katz và skalka, 1994):
 Mã hoá một dạng của capsid protein
 Mã hoá transcriptase đảo ngược biến RNA bộ gen thành bản sao DNA,
integrase cần cho đầu bám của DNA vào vật chủ bộ gen và đôi khi protease cần cho sự
phân cắt của gen trong sự chín.
 Mã hoá bề mặt và xuyên màng protein thấy trong bao bọc
Một số retroviruses cũng chứa các gen khác; ví dụ protease có thể mã hoá bằng
gen riêng biệt. Mọi protein mã hoá bằng bịt miệng, pol và protease được thể hiện từ
bản sao axit ribonucleic của hệ gen hoàn chỉnh. Để nén số này của gen vào bộ gen nhỏ,
virus sử dụng một số chiến lược như là nối và ribosomal frameshifting (Farabaugh,
1996). Ví dụ như, gen protease thường nằm gối lên bịt miệng hoặc pol nhưng vẫn còn
được tạo ra từ cùng phân tử mRNA. Gen cấu trúc retroviral là cạnh sườn trong bộ gien
bằng ltrs, trở thành lặp lại như một phần của quy trình sự nhân bản trước khi tích hợp
vào bộ gen vật chủ. Tổng hợp ARN virus bắt đầu từ người tổ chức đơn trong lefthand
LTR và kết thúc bằng tín hiệu polyadenylat trong LTR bên phải.
Gói hàng ràng buộc vào lượng thêm acid nucleic có thể duy trì trong bộ gen
virus nghĩa là vật chủ trung gian dựa trên retroviruses thường là sự nhân bản không
hoàn chỉnh. Do đó, khi chúng tôi thảo luận cho vật chủ trung gian adenoviral trên, hạt
virus nhiễm khuẩn phải tạo ra trong dòng tế bào xây dựng đặc biệt để có thể cung cấp
protein của virus cần thiết. Chẳng hạn như, gen ngoại có thể là dòng vô tính vào plasmit
chứa DNA phiên bản thành phần mô tả ở trên sao cho nó nằm giữa và bên phải-trái ltrs,
Virus tạo ra từ dòng tế bào này có thể sau đó dùng để gây bệnh tế bào đích, nơi vật chủ
trung gian sẽ tích hợp vào bộ gen và gen ngoại được thể hiện. Ngoài gen ngoại, thì các
gen khác cũng dùng để đánh giá tế bào riêng đã lấy DNA tái kết hợp.
Ưu thế chủ yếu để sử dụng vật chủ trung gian bazơ retroviral phát sinh từ ổn
định của tích hợp của bộ gen virus vào vật chủ. Tích hợp của bản sao duy nhất của
DNA virus ở địa điểm ngẫu nhiên trong bộ gen của vật chủ cho phép cách diễn đạt lâu
dài của gen ngoại tích hợp. Ngoài ra, retroviruses đại diện cho cơ chế truyền ADN vào
tế bào rất hiệu quả. Sự bất lợi của các vật chủ trung gian là bản chất ngẫu nhiên của
quy trình tích hợp, có thể có ảnh hưởng độc trên tế bào chủ, và yêu cầu tổng quát của
retroviruses phải gây bệnh chỉ phân chia tế bào. Chỉ lentiviruses, ví dụ HIV1, cũng sẽ
gây bệnh và sao chép ở tế bào không phân chia. Do đó, nhiều nỗ lực đã được hướng
dẫn vào làm vật chủ trung gian lentivirus an toàn một cách phù hợp (zufferey và cộng
sự, 1998)
10.4 Bút đánh dấu có thể chọn được và Gene Amplification trong tế bào động vật
Như mọi DNA khác quy trình chúng tôi đã thảo luận, sát nhập ADN ngoại lai
vào tế bào động vật cần đi theo bởi kiểu hình biến thành phân biệt tế bào transfected
với các tế bào không lấy ở ADN ngoại lai (Hình 10.7)
Sản xuất protein trong y học
248
Hình 10.7 Cấu trúc của bleomycin-bleomycin ràng buộc prôtêin phức hợp
(almaruyama sâu trong bên prôtêin nhị trùng (xanh và xanh dương)
Một vài thí nghiệm đầu tiên để nhận biết tế bào động vật transfected liên quan
bổ sung của dinh dưỡng khuyết điểm ở dòng tế bào. Chẳng hạn như, tế bào của con
người có khuyết điểm trong gen mã hoá phosphoribosyltransferase guanine
hypoxanthine (HPRT ; bộ phận của chu kỳ inosinate cho giá trị thu hồi của vòng purin
các bazơ và sản xuất của inosine monophosphate) và do đó không thể tăng trưởng ở
hypoxanthine, aminopterin và thymidine một hợp chất có chứa thymin và đường
ribose. Rất hiếm khi, tế bào có thể cô lập tăng trưởng, biểu lộ rằng chúng có phải khả
năng để làm HPRT từ tế bào dạng tự nhiên (szybalska và szybalski, 1962). Tương tự,
chuột nhắt tế bào thiếu hụt enzyme kinase thymidine một hợp chất có chứa thymin và
đường ribose( TK, là một phần của chuỗi các phản ứng hóa sinh có giá trị thu hồi sinh
tổng hợp nucleotide) không thể phát triển trên HAT trung bình, nhưng có thể
transfected với virus bệnh mụn rộp (HSV). Tk gen để cho phép sinh trưởng trên trung
bình này (wigler và cộng sự, 1977). Một số bút đánh dấu chuyển hóa khác chẳng hạn
cũng đã được kiểm soát quy trình transfection, nhưng tất cả đều bị yêu cầu của dòng tế
bào đột biến để phát hiện biến đổi tế bào.
Điều này đã được khắc phục bằng cách sử dụng bút đánh dấu có thể chọn được
kiểu hình trội kháng thuốc đến tế bào transfected (bảng 10.1). Kháng sinh như là
ampicillin không có ảnh hưởng trên tế bào có nhân điển hình do thiếu thành tế bào
động vật. Vài kháng sinh khác, đặc biệt là các sự tổng hợp protein chất ức chế, đang
tích cực chống lại cả hai sinh vật có nhân điển hình và sinh vật chưa có nhân điển
hình. Chẳng hạn như, trực khuẩn E.coli chuyển gen vị trí tn5 mã hoá thuốc kháng sinh
- gen kháng lại (yamamoto và yokota, 1980). Thuốc kháng sinh là kháng sinh
aminoglycoside cản trở dịch mã và gây ra sự chết của tế bào vi khuẩn, cụ thể việc
nhắm vào mục tiêu của ribosomal 16S axit ribonuclenic. Ở nồng độ cao,
aminoglycosides cũng ức chế sự tổng hợp protein trong tế bào ở động vật có vú có lẽ
qua ràng buộc không rõ ràng để ribôxôm có nhân điển hình và / hoặc acid nucleic
(mingeot - leclercq, tulkens và glupczynski, 1999). Để đạt được sức đề kháng khi
phương pháp của chọn lọc, một gen khác mã hoá trong Tn5 gen chuyển vị (tạo ra
kháng sinh phosphotransferase) được đặt vào dưới kiểm soát người tổ chức ở động vật
có vú, ví dụ như HSV Tk người tổ chức hoặc người tổ chức sớm SV40. Chúng ta sẽ
Sản xuất protein trong y học
249
thảo luận người tổ chức thường điều khiển cách diễn đạt của gen trong tế bào động vật
chi tiết hơn bên dưới.
Bảng 10.1 Bút đánh dấu cho chọn lọc của đoạn ADN bổ sung lên tế bào có
nhân điển hình cao hơn.
Phơi tế bào động vật ra mức độ cao của thuốc độc quá lâu nhằm các mục đích
chọn lọc tái kết hợp có thể cho tăng giá, tần số thấp rất, đến hình thành của tế bào đã
trở thành một cách tự phát. Chẳng hạn như, chuột nhắt tế bào tiếp xúc đến
methotrexate (mô phỏng loại vitamin B rất quan trọng trong tổng hợp acid nucleic đó
là chất ức chế của enzyme dihydrofolate reductase, DHFR) đã được cho thấy để trải
qua ba kiểu đột biến để tạo ra sức đề kháng (Schimke và cộng sự, 1978) :
 Đột biến trong DHFR enzyme để tạo ra chất ức chế sức đề kháng,
 Đột biến ngăn ngừa sức hấp dẫn tế bào của thuốc và
 Sự khuếch đại của dhfr vị trí để tăng bản sao của số dhfr gen để tạo ra số lượng
đủ của enzyme để vượt qua ảnh hưởng của thuốc. Quy trình sự khuếch đại có vẻ khá
ngẫu nhiên, với vùng lớn của cạnh sườn DNA xung quanh dhfr vị trí. cũng trở thành
thổi phồng
Đột biến trong lớp cuối cùng này đặc biệt quan trọng đối với cách diễn đạt cao cấp
của gen dị vật. ADN ngoại lai là dòng vô tính vào vật chủ trung gian plasmit cũng có
Dhfr gen. Sau đó transfected vào methotrexate - tế bào đề kháng và tái kết hợp chọn
cho với sự có mặt của mức độ cao của thuốc. Tế bào thổi phồng dhfr cũng chứa nhiều
bản sao của ADN ngoại lai (Wigler và cộng sự, 1980).
10.5 Biểu hiện gen trong các tế bào động vật
Chúng tôi đã từng quan sát biểu hiện bên ngoài của gen trong các tế bào bị
nhiễm Baculovirus (Chương 8), nhưng các protein tái tổ hợp cũng có thể được sản
Sản xuất protein trong y học
250
xuất trong các tế bào động vật có vú. Việc chèn của một gen ngoại lai vào một tế bào
động vật thường không đủ để biểu hiện hiệu quả trực tiếp của nó và sản xuất các
protein được mã hóa. Các gene ngoại lai được biểu hiện phải được kết hợp với các yếu
tố kiểm soát phiên mã và dịch mã phù hợp cho các loại tế bào, trong đó protein sẽ
được sản xuất. Hầu hết các promoter sử dụng để biểu hiện gen ngoại lai trong tế bào
động vật được tha nh lập. Chúng tôi đã từng thảo luận về hệ thống biểu hiện Tet để
sản xuất protein trong tế bào động vật có vú (Chương 8). Nhiều promoter được
tha nh lập sử dụng để biểu hiện gen các tế bào chuyển đổi trong hoạt động phiên mã
trong một loạt các loại tế bào và mô, nhưng hầu hết là một số mức độ đặc hiệu mô. Ví
dụ, sử dụng rộng rãi cytomegalovirus (CMV), promoter biểu hiện độ hoạt động thấp
trong tế bào gan (Najjar và Lewis, 1999). Một promoter mạnh được tha nh lập nhằm
biểu hiện gen cho nhiều loại tế bào bao gồm các adenovirus MLP
Ngoài một promoter thích hợp, gen được biểu hiện trong các tế bào động vật
cũng yêu cầu một trang Polyadenylation, kết thúc phiên mã tín hiệu và một loạt các
yếu tố kiểm soát tịnh tiến. Nói chung, nó đã được lưu ý rằng các gen có chứa intron
được thể hiện ở mức cao hơn so với các bản sao cDNA tương đương của gen
(Buchman và Berg, 1988). Điều này có thể là do các khớp nối của phiên mã, nối và tạo
ra mRNA trong tế bào nhân chuẩn cao hơn (Maniatis và Reed, 2002).